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第二十五期 ZIC-HILIC 色譜柱

2015年02月11日source:管理員
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什么是 HILIC?


親水作用液相色譜(HILIC)是分離多種類型極性化合物和親水性化合物最有效的色譜技術。簡單的講,HILIC 是正相色譜分離的一種,但其使用反相中常使用的流動相。 一般而言,HILIC 的洗脫順序與 RPLC相反,保留隨著分析物的帶電性和親水性增加而增強。這保證了 RPLC 色譜柱上無保留化合物的直接分離。


HILIC 是一款具有親水固定相的色譜柱。可以使用水,緩沖液和高比例與水混溶的有機相作為流動相。典型的 HILIC 應用可以使用有機溶劑占 50-95%的緩沖液體系,緩沖鹽應該在有機溶劑中具有很高的溶解性,如醋酸銨的乙腈溶液。


極性化合物和親水化合物類型

HILIC 色譜柱可以分離極性化合物和親水性化合物。ZIC-HILIC 提供的選擇性適用于分離很多種類的分子如:帶有親水性或帶電性的官能團。如糖類、代謝物、酸性和堿性化合物、有機或無機離子、金屬復合物、氨基酸、肽、蛋白質片段、植物或細胞提取物等等。

這些物質通常來講具有很小或負的 LogP 值,在反相柱上保留很弱。ZIC-HILIC 色譜柱就是分離極性和親水性物質的色譜柱,其選擇性與反相色譜柱具有正交性。?


HILIC 色譜柱的分離機理

目前,HILIC 色譜柱是通過進樣分析溶質在流動相和 HILIC 固定相親水表面的水層分區而進行保留。分析物親水性越強,分區平衡越易轉向固定相固定的水層,因此分析物的保留也越強


盡管人們已經確認了固定相處于有機溶劑和水混合條件下,親水表面可以固定水層,但是 HILIC 分區理論也僅僅是依靠間接的證據。有很多研究者也認為這是復合的分離機理,包括氫鍵作用和偶級-偶級作用等,可能都起到重要的分離作用。有機溶劑的類型及濃度,緩沖鹽的類型及濃度,,以及 PH 變化都可以影響分析物的保留。


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